一、ELISA試劑盒包被抗原

1. 用 50mM 的碳酸鹽包被緩沖液 （pH 9.6） 溶解抗原， 使抗原濃度為 10-20 μg/ml，加 100 μ l/孔到 96 孔酶標(biāo)板，4℃放置。

2. 第二天棄去包被液后，用 PBST 洗滌 3 次，每孔加入 150 μ l 1％ BSA 37℃封閉 1 小時(shí)。

3. PBST 洗滌 3 次后，每孔加入 100 μl 不同倍比稀釋度的血清，并加入對(duì)照樣品，37 ℃ 孵育 2 小時(shí)。

4. PBST 洗滌 5 次后， 加入100μ l 稀釋后的 HRP 標(biāo)記的二抗， 37℃孵育 1 小時(shí)。

5. PBST 洗滌 5 次后，顯色劑顯色 20 min 后，酶標(biāo)儀上讀取 A 405 吸收值。

二、ELISA試劑盒包被細(xì)胞

1. 在 96 孔培養(yǎng)板上接種細(xì)胞數(shù)為 1 x 104 cells/well，37℃培養(yǎng)。

2. 第二天用 PBS 洗滌培養(yǎng)板 2-3 次。

3. 加入 125 μ l/well10% Formalin（1:10 稀釋），室溫下固定 15 min。

4. 用 ddH2O 洗滌培養(yǎng)板 3 次，并晾干，儲(chǔ)藏在 2- 8 ℃ 備用。

5. 用 PBST 洗滌 3 次，每孔加入 150 μl 1％ BSA 37  ℃ 封閉 1 小時(shí)。

6. PBST 洗滌 3 次后，每孔加入 100 μl 不同倍比稀釋度的血清，并加入對(duì)照樣品，37 ℃孵育 2 小時(shí)。

7. PBST 洗滌 5 次后， 加入100 μl 稀釋后的 HRP 標(biāo)記的二抗，37 ℃孵育 1 小時(shí)。

8. PBST 洗滌 5 次后，顯色劑顯色 20 min 后，酶標(biāo)儀上讀取 A 405 吸收值。

①  50mM 的碳酸鹽包被緩沖液：0.05mol/L pH9.6碳酸緩沖液，4℃，保存，Na 2CO 3 0.15 克，NaHCO 3 0.293 克,蒸餾水稀釋至 100 ml。

② ABTS 作為底物進(jìn)行顯色反應(yīng)(10ml)：0.2M Na 2HPO 4  2.4ml ；0.1M 檸檬酸 2.6ml ；ddH 2O 5ml ；ABTS 5mg；H 2O 2(30%) 4 ul （用前加入）

ELISA試劑盒注 意：

1. 一般做倍比稀釋進(jìn)行檢測，需要有相應(yīng)的對(duì)照血清。

2. 不同的顯色系統(tǒng)對(duì)應(yīng)不同的光吸收值。